青兰生物基于高通量、高稳定的基因合成平台,利用包括核酸序列的一次拼接、二次拼接、三次拼接,基因纠错等自主研发的合成技术,除可以合成常规基因序列以外,还能够合成高GC、低GC、单碱基重复、短序列重复等难度大的基因序列。除去在细菌中无法生长的基因外,目前无一失败案例,现将部分有代表性的成功案例展示如下:

Ⅰ 高GC含量

客户订单1合成周期 — 25天

描述: 序列长度942bp,总体GC含量70%, 局部41个碱基全是GC。合成周期25天, PCR扩增有难度。

部分序列展示:

CCGCCTGCGGGGCCAGCCTCAGCCAGAAGAGGAGGAAGAAGCCGCCGAGGAGCAGCCCGAGGCCCCAGGGTCTGAGGCGAGCCGCGCCGCCCCCGCCGCCGCCGCCGCCGCCGCTGCGGGGAGGAGGGGGA

局部GC分析图

客户订单2合成周期 — 7天

描述: 序列长度584bp,总体GC含量70.8%, 有大片段GC含量超过80%,。合成周期7天, 该序列无法PCR扩增.

GC分析图

客户订单3合成周期 — 7天

描述:序列长度1041bp,总体GC含量77%, 局部大片段GC含量超过90%, GC含量起伏很大。合成周期16天, 测序质量不高, 该序列无法PCR扩增。

GC分析图

客户订单4合成周期 — 13天

描述:序列长度126bp,整体GC为85.7%, 大部分区域100%GC, 序列主要为GGGGCC的重复(16次)。合成周期13天。

部分序列展示:

CCGCCTGCGGGGCCAGCCTCAGCCAGAAGAGGAGGAAGAAGCCGCCGAGGAGCAGCCCGAGGCCCCAGGGTCTGAGGCGAGCCGCGCCGCCCCCGCCGCCGCCGCCGCCGCCGCTGCGGGGAGGAGGGGGA

GC分析图

Ⅱ 低GC含量

客户订单1合成周期 — 20天

描述:序列长度462bp,整体GC为24%, 并含有大量多处polyT序列(polyT在复制时很容易发生滑动)。合成周期20天。

序列:

TTTTTTTTATTATTTTTTGGGGGTAATTTTTAAAGTATTTATTTTTTTTGGTTTGTAGAGGGCGTTTAATTTTTATAGTTTTTGTTTTTTTTTGAATATTTTGTTTTGAATTTCGTAATTTCGAAATAAGATTTTTTTTTTTTTTATTTTTTTTTCGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCGTTTTTTATTTTTTTTTTATTTATTCGATATTTATTATTTAGTTTTTAT

GC分析图

客户订单2合成周期 — 20天

描述:序列长度2642bp,整体GC为21%, 且大片段为0%, 存在大量重复序列。合成周期20天, 该序列无法扩增。

部分序列展示:

CCCAAAAAAAAGAACAGGTACAAAGTACCCTATAATACAAGCGTAAAAAAATGAGGGTAAAAATAAAAAAATAAAAAAATAAAAAAATAAAAAAATAAAAAAAATAAAAAAATAAAAAAATAAAAAAATAAAAAAATAAAAAAATAAAAAAATAAAAAAATAAAAAAATATAAAAATAAAAAAATATAAAAATAAAAAAATATAAAAATAAAAAAATATAAAAATAAAAAAATAAAAAAATATAAAAATAAAAAAATAAAAAAATATAAAAATATTTTTTA

局部GC分析图

其大片段重复测序结果

III. 单碱基重复(单碱基重复难度较高, 因为扩增非常不稳定)

客户订单1合成周期 — 16天

描述:序列长度2711bp,含有poly24A, 同时含有其它较短的polyA或T,合成周期16天。

部分序列展示:

TTTCTATAAGTGTTAGTTGTAACTTATGAAATATCGATTTAAATTCGAAGTGTTGTTTGCAGGATATAAATCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAATTAA

测序峰图截图

客户订单2合成周期 — 17天

描述:序列长度2176bp,含有poly31A, 同时该序列含有大量重复,合成周期17天 。

部分序列展示:

CCCGATAATCACTACTTAAGCACACAGTCAAGATTGTCAAAAGATCCGAATGAAAAGCGTGATCACATGGTTTTATTGGAATTTGTCACCGCTGCAGGAATAACTCACGGAATGGACGAGCTTTATAAGGGTTCTGGTGGTGGTTCTGGTTAAGATCCTACGGTACTTATTGCCAAGAAAGCACGAGCATCAGCCGTGCCTCCAGGTCGAATCTTCAAACGAGCAGACGATATGGCGTCGCTCGCTCCAGTATTCCAGGGTTCATCAGATCCTACGGTACTTATTGCCAAGAAAGCACGAGCATCAGCCGTGCCTCCAGGTCGAATCTTCAAACGAGCAGACGATATGGCGTCGCTCGCTCCAGTATTCCAGGGTTCATCAGATCCTACGGTACTTATTGCCAAGAAAGCACGAGCATCAGCCGTGCCTCCAGGTCGAATCTTCAAACGAGCAGACGATATGGCGTCGCTCGCTCCAGTATTCCAGGGTTCATCAGATCCTACGGTACTTATTGCCAAGAAAGCACGAGCATCAGCCGTGCCTCCAGGTCGAATCTTCAAACGAGCAGACGATATGGCGTCGCTCGCTCCAGTATTCCAGGGTTCATCAGATCCTACGGTACTTATTGCCAAGAAAGCACGAGCATCAGCCGTGCCTCCAGGTCGAATCTTCAAACGAGCAGACGATATGGCGTCGCTCGCTCCAGTATTCCAGGGTTCATCAGATCCTACGGTACTTATTGCCAAGAAAGCACGAGCATCAGCCGTGCCTCCAGGTCGAATCTTCAAACGAGCAGACGATATGGCGTCGCTCGCTCCAGTATTCCAGGGTTCATCAGATCCTACGGTACTTATTGCCAAGAAAGCACGAGCATCAGCCGTGCCTCCAGGTCGAATCTTCAAACGAGCAGACGATATGGCGTCGCTCGCTCCAGTATTCCAGGGTTCATCAGATCCTACGGTACTTATTGCCAAGAAAGCACGAGCATCAGCCGTGCCTCCAGGTCGAATCTTCAAACGAGCAGACGATATGGCGTCGCTCGCTCCAGTATTCCAGGGTTCATCAGATCCTACGGTACTTATTGCCAAGAAAGCACGAGCATCAGCCGTGCCTCCAGGTCGAATCTTCAAACGAGCAGACGATATGGCGTCGCTCGCTCCAGTATTCCAGGGTTCATCAGATCCTACGGTACTTATTGCCAAGAAAGCACGAGCATCAGCCGTGCCTCCAGGTCGAATCTTCAAACGAGCAGACGATATGGCGTCGCTCGCTCCAGTATTCCAGGGTTCATCAGATCCTACGGTACTTATTGCCAAGAAAGCACGAGCATCAGCCGTGCCTCCAGGTCGAATCTTCAAACGAGCAGACGATATGGCGTCGCTCGCTCCAGTATTCCAGGGTTCATCAGATCCTACGGTACTTATTGCCAAGAAAGCACGAGCATCAGCCGTGCCTCCAGGTCGAATCTTCAAACGAGCAGACGATATGGCGTCGCTCGCTCCAGTATTCCAGGGTTCATCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA

polyA峰图

客户订单3合成周期 — 30天

描述:序列长度6484bp,含有poly17G, 同时含有其它多种重复。合成周期30天。

部分序列展示:

CATTATTTAAAGTTACGTGAGGGGGGGGGGGGGGGGGTATTTATACTTTGCGGCACTGCAAATATTTTCGGAAACTTGAATTTCCATTTCAATTGCTTCCGGGAGTTTG

测序峰图

IV. 短序列重复

客户订单1合成周期 — 16天

描述:序列长度2592bp,含有poly12(TA), 并含有其它重复。合成周期16天。

部分序列展示:

ATGATAAAACGGAGCACTTGCCAAAGTAATTAACGCCCATTAAAAAGAAGGCATAGGAGGCATATACATATATATATATATATATATATATGGCTGCTGACAGATATTCTGCACTTAAAAACTAAAAATATTATACCAACTTTTCTTTTTCTTCCCGTTCAGTTTGCTTGATTGGCCCAGCTCTTTGAAGAAAGGAAAAAATGCGGAGAGGGAGCCAATGAGATTTTAAAGGGTATATTACTTATCTTATCGATAAGCAGTATTGATATTAAAGGGACAGTTTTATCGTTGGTTAATATGGAAAAAGTGATGACCATGATGCCTTTCTTAAAAAGAGTATTTCTTTTTATTTCACTTTCACATAAACAGTTAATGACTTCTGACTTTGAGCCGTTCGAACTCAGTTATATAAAGGTACATACATAGGCCACACACACACACACACACACATATATATATATATATAGGGAAGTAGCAACAG

测序峰图

客户订单2合成周期 — 13天

描述:序列长度1014bp,含有poly19(AT)。合成周期13天。

部分序列展示:

ACAGTTTTACAACTTAGTCTCTTATGAAGTTACTTACCAATGAGAAATAGAGGCTCTTTCTCGAGAAATATGAATATGGATATATATATATATATATATATATATATATATATATATGTAAACTTGGTTCTTTTTTAGCTTGTGATCTCTAGCTTGGGTCTCTCTCTGTCGTAACAGTTGTGATATC

测序峰图

客户订单3合成周期 — 12天

描述:序列长度4229bp,含有poly16(AC), 并含有poly8(CG)。合成周期12天。

部分序列展示:

CTTTACAGATGGAGAAATTGAGGCACAGAGAACGCGCGCGCGCGCGCGCACACACACACACACACACACACACACACACACTAGCACCCCAGGTACC

测序峰图

客户订单4合成周期 — 14天

描述:序列长度246bp,该序列含有poly70(GAC), 最后提交的是poly69(GAC)。合成周期14天。

序列:

TTTGCTAGCTTTATCGATGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACGACTTCGAATTTTCTAGATTT

测序峰图